جداسازی پلاسماسل از خون محیطی و هم کشتی با سلول استرومای مغز استخوان به منظور کشت طولانی مدت

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

 جداسازی پلاسماسل از خون محیطی و هم کشتی با سلول استرومای مغز استخوان به منظور کشت طولانی مدت دارای ۱۳ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد جداسازی پلاسماسل از خون محیطی و هم کشتی با سلول استرومای مغز استخوان به منظور کشت طولانی مدت  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی جداسازی پلاسماسل از خون محیطی و هم کشتی با سلول استرومای مغز استخوان به منظور کشت طولانی مدت،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

بخشی از متن جداسازی پلاسماسل از خون محیطی و هم کشتی با سلول استرومای مغز استخوان به منظور کشت طولانی مدت :

نام کنفرانس، همایش یا نشریه : مجله دانشکده پزشکی اصفهان

تعداد صفحات :۱۳

مقدمه: فن اوری تهیه انتی بادی بر پایه تک سلول B روشی نوین در تهیه انتی بادی مونوکلونال انسانی محسوب می گردد. مهم ترین بخش این فن اوری، کشت طولانی مدت پلاسماسل جدا شده از خون جهت ترشح انتی بادی است. با توجه به این که دلیل زنده ماندن طولانی مدت پلاسماسل ها در مغز استخوان حضور سیگنال های اطراف ان ها است، جهت کشت پلاسماسل درشرایط In vitro لازم است این سیگنال ها به واسطه حضور یک لایه سلول تغذیه کننده تامین شوند. به نظر می رسد که از میان انواع مختلف این سلول ها، سلول های استرومای مغز استخوان (BMSCs یا Bone marrow stromal cells) گزینه مناسب تری جهت هم کشتی با پلاسماسل محسوب می گردند. هدف از این پژوهش، جداسازی پلاسماسل های ترشح کننده انتی بادی از خون محیطی و زنده نگهداشتن ان ها در شرایط In vitro می باشد.روش ها: پس از تزریق واکسن کزاز، تیتر انتی بادی در سرم خون افراد داوطلب با روش (Enzyme-linked immunosorbent assay) ELISA اندازه گیری شد PBMCs ((Peripheral blood mononuclear cells جدا شده از خون فرد ایمن با آنتی بادی های رنگی اختصاصی سه نشانگر سطحی ۴۵CD، ۱۹CD و ۳۸CD رنگ امیزی شدند. پس از ان پلاسماسل ها به روش FACS ((Fluorescence-activated cell sorting از سایر جمعیت های سلولی موجود، جدا و در پلیت ۹۶ خانه ای Sort شدند. سپس همراه با یک لایه BMSCs کشت داده شدند. پس از گذشت ۱۰ روز، از پلاسماسل ها RNA استخراج شد و واکنش RT-PCR ( (Reverse transcription polymerase chain reactionبا استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن انتی بادی انجام شد.یافته ها: روز ششم پس از واکسیناسیون، تیتر انتی بادی سرم، IU/ml 16به دست امد که نشان از پاسخ ایمنی بسیار مناسب در مقابل واکسن کزاز بود. همچنین، آنالیز فلوسایتومتری نمونه خون محیطی فرد ایمن شده در روز هفتم، درصد پلاسماسل موجود در PBMCs را حدود ۰.۳ درصد نشان داد. در نتیجه انجام واکنش RT-PCR با پرایمرهای اختصاصی ژن انتی بادی، قطعه VH ((Variable heavy chain به طولbp 400 تکثیر شد. این نتیجه، زنده بودن پلاسماسل ها و همچنین بیان ژن انتی بادی را در روز دهم در شرایط هم کشتی با BMSCs تایید نمود.نتیجه گیری: حاصل این پژوهش، فراهم اوردن شرایط مناسب به منظور کشت پلاسماسل برای مدت ۱۰ روز در محیط In vitro بود. بنابراین بخشی از فن اوری نوین تهیه انتی بادی بر پایه تک سلول B نیز پایه گذاری شد. نتایج به دست امده در این پژوهش شامل درصد پلاسماسل موجود در PBMCs و اندازه قطعه ژنی VH تکثیر شده، با سایر مطالعات انجام شده در این زمینه مطابقت داشت.

کلید واژه: انتی بادی مونوکلونال انسانی، پلاسماسل، سلول استرومای مغز استخوان، FACS، هم کشتی