دانش رسان |
مرکز علم و دانش کشور مقاله تغییرات فعالیت بیولوژیکی آنزیمهای بزاقی در سیگاریها
در حال بارگذاری
توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد
مقاله تغییرات فعالیت بیولوژیکی آنزیمهای بزاقی در سیگاریها دارای ۱۴ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد مقاله تغییرات فعالیت بیولوژیکی آنزیمهای بزاقی در سیگاریها کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی مقاله تغییرات فعالیت بیولوژیکی آنزیمهای بزاقی در سیگاریها،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
بخشی از متن مقاله تغییرات فعالیت بیولوژیکی آنزیمهای بزاقی در سیگاریها :
مقدمه
استفاده از سیگار موجب می شود تعداد زیادی مواد شیمیایی سمی از طریق حفره دهانی به سیستم بیولوژیکی بدن وارد شوند. این ترکیبات خطرناک ممکن است در دهان ایجاد مشکلات لثه، پوسیدگی دندان و بیماریهای دیگر بافت دهانی شوند .(۲۷) به علاوه، برخی بیماریهای مهم انسان از قبیل مشکلات قلبی عروقی و تنفسی نیز ممکن است به دلیل سیگار کشیدن ایجاد و یا تشدید شوند.
تحقیقات نشان داده اند که دود سیگار حاوی بیش از ۴۰۰۰
نوع مواد شیمیایی است که حداقل یک دهم آنها در دسته کارسینوژن ها طبقه بندی شده اند .(۳۴) بر اساس تحقیقات Peterson و همکاران (۲۰۱۰) دود سیگار همچنین حاوی ترکیبات اکسیدانت قوی مانند رادیکالهای اکسیژن، ازت و آلدئیدهای فرار است .(۲۴) ترکیبات اکسید کننده می توانند آسیبهای جدی به مولکولهای حیاتی
۱۲۵
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
مانند پروتئینها و آنزیمها وارد کرده و مشکلات فیزیولوژیکی مختلف را سبب شوند. گونه های فعال اکسیژن (ROS) و نیتروژن (RNS) در اثر متابولیسم طبیعی سلولی به وجود می آیند. گونه های ROS و RNS
می توانند مفید و یا مضر باشند و به این ترتیب نقش دو جانبه ای در سیستمهای زنده ایفاء می کنند . اثرات مفید
ROS در غلظتهای پائین نامتوسط رخ می دهد به عنوان مثال دفاع در برابر عوامل عفونی و همچنین عملکرد تعدادی از تقسیمهای سیگنالینگ سلولی به عنوان عملکرد فیزیولوژیکی ROS شناخته شدهاند. مثال دیگری از اثرهای مفید ROS در غلظت پایین تا متوسط، القای واکنش متوژنیک است. این در حالی است که تولید بالای ROS /RNA در سیستمهای بیولوژیکی و همچنین نقص و کمبود در آنتی اکسیدانتهای آنزیمی و غیر آنزیمی اثرات مضر رادیکال آزاد و خطرات بیولوژیکی همانند استرس اکسیداتیو و نیتروزاتیو را ایجاد می کند ۳۸) و .(۳۹ بسیاری واکنشهای آنزیمی می تواند منبع تولید رادیکال آزاد باشند، به عنوان مثال می توان از واکنشهای زنجیره تنفسی، فاگوسیتوز و سنتز پروستا گلاندین نام برد. آنتی اکسیدانتها با جمع آوری رادیکال و یا جلوگیری از تشکیل آنها، از سلولهای بدن محافظت می کنند . ترکیبات آنتی اکسیدانت الکترون اضافی دارند که می توانند در اختیار رادیکال آزاد قرار دهند با این کار رادیکال آزاد دیگر برای جفت کردن الکترونها به قسمتهای حیاتی حمله نمی کند . (۳۸ )
ترکیبات آنتی اکسیدانت نقش مهمی در حفظ سلامتی ایفاء می کنند. آنتی اکسیدانتهایی از قبیل آسکوربیک اسید، فنولیک اسید، پلی فنلها و فلاونوئیدها از طریق جمع آوری رادیکالهای پر اکسید و هیدروپراکسید می توانند از آسیب اکسیداتیو که منجر به بیماریهای پر خطر می شود ، جلوگیری کنند . نتایج برخی تحقیقات پیشنهاد می کند که آنتی اکسیدانتها از خطر بیماریهای قلبی و سرطان می کاهند
۳۳) و .(۴۲ بزاق اولین مایع بیولوژیکی است که با مواد خارجی مثل غذا، نوشیدنیها یا ترکیبات فرار موجود در
محیط مواجهه شده و واکنش می دهد و در نتیجه نقش مهم در سلامت حفره دهانی دارد .(۶) از آنجا که جمع آوری بزاق از طریق روشهای غیر تهاجمی انجام شده و نیاز به تخصص ویژه ای ندارد، بنابراین می تواند به عنوان یک مایع بیولوژیکی ارزشمند برای بررسی برخی تغییرات بیوشیمیایی مورد توجه قرار گیرد. بزاق دارای مکانیسمهای دفاعی مختلف است که باعث حمله به باکتری، ویروس و قارچها شده و در برابر حمله مکانیکی و یا شیمیایی نیز نقش محافظتی دارد. Nagler و همکاران (۲۰۰۲) ثابت کردند بزاق توانایی آنتی اکسیدانتی داشته و می تواند گونه های رادیکال اکسیژن مثل سوپر اکسید (O2-) را غیرفعال کند. رادیکالهای آزاد قوی ممکن است باعث تغییرات مختلف روی موکوس دهانی و ایجاد عفونتهای متعدد و حتی سرطان شوند .(۲۲) خاصیت ضد سرطان بزاق به طور ویژه در پیشگیری از پیشرفت سرطان دهان در تحقیقات زیادی مورد بررسی قرار گرفته است ۴) و . (۲۱
سیستم آنتی اکسیدانتی بزاق شامل مولکولهای غیر آنزیمی
و آنزیمهاست آنتی اکسیدانتهای بزاقی شامل سه گروه می باشند: آنتی اکسیدانتهای خارج سلولی مثل اوریک اسید، آنتی اکسیدانتهای سلولی مثل آسکوربیک اسید و آنتی اکسیدانتهای آنزیمی مثل سوپر اکسید دیسموتاز، پراکسیداز
و کاتالاز. از مهم ترین آنتی اکسیدانتهای بزاقی می توان اسید اوریک و آنزیم پراکسیداز را نام برد که هر دو محلول در آب هستند. آنتی اکسیدانتهای محلول در لیپید توسط لیپو پروتئینها حمل می شوند که غلظتشان در بزاق خیلی کم است در واقع کمتر از ۱۰ درصد ظرفیت آنتی اکسیدانتی بزاق را ایجاد می کنند ۱۴) و .(۲۲ در این تحقیق فعالیت سه آنزیمهای آنتی اکسیدانت، پراکسیداز، سوپراکسید دیسموتاز و کاتالاز، در بزاق افراد سیگاری با دسته ای شاهد مقایسه شد. آنزیمهای پراکسیداز بزاقی دو نوع می باشند، ولی از آنجایی که از نظر خواص آنتی اکسیدانتی تفاوتی بین فعالیت دو فرم پراکسیداز نیست، در
۱۲۶
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
این تحقیق فعالیت کل پراکسیداز بزاقی بدون توجه به نوع آنها بررسی گردید.
مواد و روشها
نمونه برداری: داوطلبها شامل دو دسته ۲۵ نفری مرد -۲۰ ۲۵ سال بودند.گروه مورد آزمایش افرادی بودند که همه آنها از حدود ۵-۳ سال قبل سیگاری شده بودند و روزانه
۱۲-۱۰ عدد سیگار از نوع مشابه استفاده می کردند. گروه شاهد از میان افراد سالم با سن و شرایط مشابه ولی غیر سیگاری انتخاب شدند. نمونه های بزاق غیر تحریکی که طی ۳ دقیقه ترشح شده بودند به حجم حدود ۲۰-۱۰ میلی لیتر در لوله های موئین استریل جمع آوری، علامت گذاری و تا هنگام آزمایش در -۷۰ درجه نگهداری شدند.
برای هر سنجش آنزیمی، سپس نمونههای بزاقی به مدت
۳۰ دقیقه با سرعت ۶۰۰۰ دور/دقیقه سانتریفیوژ شدند و از مایع رویی زلال برای آزمایش مربوطه استفاده شد.
محاسبه سرعت جریان بزاق غیر تحریکی: سرعت جریان
(Flow Rate) با تقسیم حجم بزاق غیر تحریکی جمع آوری شده (میلی لیتر) به زمان لازم برای جمع شدن آن حجم (دقیقه) به دست آمد.
اندازه گیری (pH) نمونه های بزاق: مقدار pH نمونه های بزاقی، بعد از عمل سانتریفیوز و رقیق نمودن آنها توسط آب مقطر (به میزان ۵۰ درصد)، با استفاده از دستگاه pH
متر، که توسط بافرهایی با pH مشخص کنترل شده بود، اندازه گیری گردید.
تعیین فعالیت سوپراکسید دیسموتاز :(SOD) فعالیت آنزیم سوپراکسید دیسموتاز، با استفاده از روش اسپکتروفتومتری اندازهگیری شد .(۳۷) در عمل، مخلوط مورد آزمایش متشکل از ۰/۵ میلی لیتر محلول واکنش
۰/۱ EDTA) میلیمولار، بافرفسفات ۵۰ میلیمولار، نیتروبلوتترازولوم ۷۵ (NBT) میکرومولار و ریبوفلاوین
۰/۲۱ میلیمولار) با یک میلی لیتر بزاق مخلوط گردید.
کووتهای حاوی محلول واکنش به مدت ۳۰ دقیقه در حالی که به آرامی به هم زده میشدند، در معرض پرتو فلورسانس ۲) عدد لامپ ۲۰ وات فلورسانس) قرار گرفتند و سپس جذب نمونهها و کنترلها در طول موج ۵۶۰
نانومتر در مقابل بلانک قرائت شد. در نهایت، با استفاده از فرمول زیر مقدار فعالیت آنزیم سوپراکسید دیسموتاز بزاقی تعیین گردید .(۳۵)
جذب بلانک- جذب نمونه مورد آزمایش
—————————— × ۱۰۰
جذب بلانک
هر واحد فعالیت SOD عبارت است از مقداری از آنزیم که برای ۵۰ درصد مهار احیای فتوشیمیایی NBT تحت شرایط سنجش لازم باشد .(۱)
سنجش فعالیت پراکسیداز(:(POD برای اندازهگیری فعالیت آنزیم پراکسیداز از سوبسترای -۴آمینوآنتی پیرین در حضور پراکسید هیدروژن استفاده شد و فعالیت آنزیم در دمای اطاق در بافر مشخص اندازهگیری گردید. نمونه حاوی ۴۸۰ میکرولیتر -۴آمینو آنتی پیرین ۴۸۰ +
میکرولیتر پراکسید هیدروژن ۴۰ + میکرولیتر بزاق بود. لوله بلانک (شاهد) نیز حاوی ۴۸۰ میکرولیتر -۴آمینو آنتی پیرین ۴۸۰ + میکرولیتر پراکسید هیدروژن ۴۰ + میکرولیتر بافر فسفات با pH مساوی ۷/۰ بود. نمونههای استاندارد بعد از رسیدن به دمای مورد نظر به سوبسترا اضافه شدند و پیشرفت واکنش آنزیمی با استفاده از اسپکتوفتومتر در طول موج ۵۱۰ نانومتر مورد بررسی قرار گرفت و تغییرات جذب بر زمان ثبت شد. در نهایت، دادههای به دست آمده را بر عدد ۶/۵۸ تقسیم کرده فعالیت پراکسیداز محاسبه گردید . (۱۰)
فعالیت آنزیم کاتالاز(: (CAT برای اندازهگیری فعالیت
کاتالاز، بافرفسفات ۵۰ میلی مولار (pH = 7) با ۱۰ میلی-
مولار پراکسید هیدروژن ترکیب شده و سپس دو کووت از جنس کوارتز انتخاب شدند. در کووت بلانک ۵۰۰ میکرو-
لیتر از ترکیب بافرفسفات و پراکسید هیدروژن و در کووت
۱۲۷
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
دیگر ۴۶۰ میکرولیتر از ترکیب بافرفسفات و پراکسید هیدروژن و ۴۰ میکرولیتر از بزاق اضافه شده و با استفاده از دستگاه اسپکتوفتومتر به صورت کاینتیک در طول موج
۲۴۰ نانومتر به مدت ۲ دقیقه و به فاصلههای ۱۰ ثانیهای ثبت گردید و در نهایت اعداد به دست آمده بر عدد ۳۹/۴
تقسیم شد و فعالیت آنزیم کاتالاز محاسبه گردید . (۴۰ )
مطالعات آماری: همه آزمایشهای سنجش آنزیمی با حداقل
۳ تکرار انجام شد و سپس آنالیزهای آماری مربوطه با استفاده از آزمون دانکن در SPSS صورت گرفت و نمودارهای تغییرات مربوطه در برنامه Excel رسم شد.
جدول -۱ تغییرات سرعت جریان بزاق در اثر استفاده از سیگار. اعداد داده شده میانگین حجم جمع آوری شده از هر داوطلب میانگین ± انحراف استاندارد (SD) می باشند.
فاکتور بزاقی سیگاری (متوسط (SD ± غیرسیگاری (متوسط(SD ± مقدار P*
سرعت جریان (ml/min) 1/18 ± ۰/۳۱ ۵/۰۵ ± ۰/۹ ۰/۰۰۱
مقدار pH 5/9 ± ۰/۲۳ ۷ ± ۰/۱۲ ۰/۰۰۱
سوپراکسید دیسموتاز (U/ml) 0/317 ± ۰/۰۳ ۰/۵۸۲ ± ۰/۰۸ ۰/۰۰۱
فعالیت پراکسیداز (mU/ml) 0/014 ± ۰/۰۰۹ ۰/۰۲۸ ± ۰/۰۰۸ ۰/۰۰۱
فعالیت کاتالاز (U/ml) 0/016 ± ۰/۰۰۷ ۰/۰۴۷ ± ۰/۰۱۳ ۰/۰۰۱
شکل -۱ مقایسه فعالیت سوپراکسید دیسموتاز در بزاق افراد سیگاری در مقایسه با داوطلبهای سالم. اعداد استفاده شده میانگین آزمایشهای مربوط به مجموع آزمودنیها هستند.
نتایج
این پژوهش با هدف بررسی اثر دود سیگار بر تغییرات آنتی اکسیدانتهای بزاقی مردان انجام گردید. از آنجایی که حجم بزاق و pH آن می توانند از عوامل مهم اثر گذار روی فعالیت آنتی اکسیدانتی بزاق داشته باشد، تغییرات آنها
نیز مورد بررسی قرار گرفتند. سرعت جریان بزاق با اندازه گیری حجم جمع آوری شده در زمان معین و سپس تبدیل به میلی لیتر/دقیقه تعیین شد. نتایج نشان دادند که کاهش حجم بزاق در افراد سیگاری نسبت به گروه شاهد غیر سیگاری، تفاوت معنی داری دارند (جدول .(۱ تغییرات
pH در افراد سیگاری به طور متوسط ۳۰ درصد کاهش
۱۲۸
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
نشان می دهند. با توجه به داده های این جدول که همه اکسیدانتی مورد مطالعه نیز کاهش یافتند.
اعداد میانگین همه داوطلبهاست، فعالیت هر سه آنزیم آنتی
شکل -۲ مقایسه فعالیت پراکسیداز در بزاق افراد سیگاری در مقایسه با داوطلب های سالم. اعداد استفاده شده میانگین آزمایش های مربوط به مجموع آزمودنی ها هستند.
شکل -۳ مقایسه فعالیت کاتالاز در بزاق افراد سیگاری در مقایسه با داوطلب های سالم. اعداد استفاده شده میانگین آزمایش های مربوط به مجموع آزمودنی ها هستند.
اشتراک‌گذاری:
- در صورتی که به هر دلیلی موفق به دانلود فایل مورد نظر نشدید با ما تماس بگیرید.
