مقایسه تعداد نسخه های درج شده ژن IP-10 با استفاده از سیستم تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی بر اساس سیستم ترانسپوزونی PiggyBac در ژنوم سلول های Human Embryonic Kidney

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

 مقایسه تعداد نسخه های درج شده ژن IP-10 با استفاده از سیستم تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی بر اساس سیستم ترانسپوزونی PiggyBac در ژنوم سلول های Human Embryonic Kidney دارای ۱۶ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد مقایسه تعداد نسخه های درج شده ژن IP-10 با استفاده از سیستم تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی بر اساس سیستم ترانسپوزونی PiggyBac در ژنوم سلول های Human Embryonic Kidney  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی مقایسه تعداد نسخه های درج شده ژن IP-10 با استفاده از سیستم تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی بر اساس سیستم ترانسپوزونی PiggyBac در ژنوم سلول های Human Embryonic Kidney،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

بخشی از متن مقایسه تعداد نسخه های درج شده ژن IP-10 با استفاده از سیستم تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی بر اساس سیستم ترانسپوزونی PiggyBac در ژنوم سلول های Human Embryonic Kidney :

نام کنفرانس، همایش یا نشریه : مجله دانشکده پزشکی اصفهان

تعداد صفحات :۱۶

مقدمه: یکی از چالش های پیش رو در روش های مرسوم تولید پروتئین نوترکیب که ترانسژن به صورت خطی به سلول میزبان وارد می شود، هتروژنی در تعداد نسخه های ترانسژن در کلون های مختلف به دست آمده است که منجر به بیان ژن در سطوح مختلف می شود. گذشته از کارایی پایین درج خطی در ژنوم میزبان، پدیده ای دیگر به نام Position effect باعث کمتر شدن کارایی بیان ژن می گردد. PiggyBac کلاسی از DNA ترانسپوزونی است که می تواند به صورت مکانیزم Cut and paste در ژنوم سلول میزبان جابه جا شود. برخی خصوصیات منحصر به فرد این ترانسپوزون، آن را به یکی از وکتور های مناسب در مطالعات انتقال ژن تبدیل کرده است. انتقال ترانسژن با حجم بالا و درج در نواحی فعال از نظر رونویسی، از جمله خصوصیات مهم این ترانسپوزون است که می توان از آن در تولید پروتئین نوترکیب با کارایی بالا بهره برد. در این تحقیق، تعداد نسخه های درجی در کلون های به دست آمده از سیستم تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی این سیستم در رده سلولی HEK (Human embryonic kidney) مقایسه شده است.روش ها: تولید سازه های تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی سیستم ترانسپوزاز حاوی ژن IP-10 و ژن مقاومت به آنتی بیوتیک هیگرومایسین با استفاده از روش های کلونینگ مولکولی به انجام رسید. رده سلولی HEK پس از تکثیر در پلیت های سلولی جهت انجام ترانسفکشن Seed شدند. سازه ها با استفاده از کیت لیپوفکتامین ۲۰۰۰ ترانسفکت شدند و پس از ۴۸ ساعت مورد تیمار با آنتی بیوتیک هیگرومایسین به مدت دو هفته قرار گرفتند. کلون های به دست آمده پس از استخراج DNA ژنومی با تکنیک (Absolute real-time polymerase chain reaction) Absolute real-time PCR از نظر تعداد نسخه های ژنی درج شده مورد بررسی قرار گرفتند.یافته ها: تعداد نسخه های ژنی به دست آمده با استفاده از سیستم تک پلاسمیدی در هر سلول، برابر با ۵ نسخه بود، در حالی که این عدد در سیستم دو پلاسمیدی برابر با دو نسخه بود.نتیجه گیری: بررسی نتایج حاصل از تعداد نسخه های درجی در سیتم های تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی نشان داد که سیستم تک پلاسمیدی کارایی بالاتری از لحاظ تعداد نسخه های درجی دارد و می توان با کلون کردن ژن مورد نظر و کاست بیان کننده آنزیم ترانسپوزاز در یک پلاسمید واحد، تعداد نسخ بیشتری جهت بیان بیشتر پروتئین نوترکیب به دست آورد.

کلید واژه: PiggyBac ترانسپوزون، ژن درمانی، پروتئین نوترکیب، تعداد نسخه های ترانسژن