طراحی، ساخت و ارزیابی بیان پلاسمید نوترکیب pIRES-Igk/mIL18/Fc با هدف استفاده در مطالعات واکسن

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

 طراحی، ساخت و ارزیابی بیان پلاسمید نوترکیب pIRES-Igk/mIL18/Fc با هدف استفاده در مطالعات واکسن دارای ۱۴ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد طراحی، ساخت و ارزیابی بیان پلاسمید نوترکیب pIRES-Igk/mIL18/Fc با هدف استفاده در مطالعات واکسن  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی طراحی، ساخت و ارزیابی بیان پلاسمید نوترکیب pIRES-Igk/mIL18/Fc با هدف استفاده در مطالعات واکسن،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

بخشی از متن طراحی، ساخت و ارزیابی بیان پلاسمید نوترکیب pIRES-Igk/mIL18/Fc با هدف استفاده در مطالعات واکسن :

نام کنفرانس، همایش یا نشریه : مجله علوم پزشکی مدرس، آسیب شناسی زیستی (علوم پزشکی مدرس)

تعداد صفحات :۱۴

هدف: اینترلوکین ۱۸ سایتوکاینی است که نقش مهمی در پاسخ سلول های T کمکی نوع یک بازی می کند و بنابراین پلاسمید بیان کننده آن، به عنوان یک ادجوانت قوی ژنتیکی در زمینه مطالعه واکسن های DNA به شمار می رود. در این مطالعه پلاسمید جفت بیانی کد کننده اینترلوکین ۱۸، ترشحی (و به صورت متصل با قسمتی از FCg2a) ساخته شد و بیان این سایتوکین نوترکیب ارزیابی شد. مواد و روش ها: RNA از سلول های تحریک شده طحال موش استخراج و با استفاده از RT-PCR قطعات cDNA متعلق به اینترلوکین ۱۸ موشی (mIL-18) و بخشی از توالی FCg2a ساخته شد. در ادامه به منظور ساخت قطعه mIL-18/Fc ابتدا قطعات FC و اینترلوکین ۱۸ موشی در پلاسمید pSL1180 وارد شده و سپس این قطعه در پلاسمید pSectag2a به منظور اضافه شدن توالی نشانه کاپای ایمنوگلبولین (Igk) کلون شد. در نهایت Igk/mIL-18/Fc درمیان سایت آنزیمی NheI/XmaI، پایین دست ناحیه پروموتوری سیتومگالوویروس، در ناقل pIRES2-EGFP کلون و پلاسمید pIRES-Igk/mIL-18/Fc ساخته شد. سپس این پلاسمید در رده سلولی HEK293T به وسیله محلول ترانسفکشن توربوفکت ترانسفکت شده و بیان آن با روش الایزا ارزیابی شد. نتایج: بررسی هضم آنزیمی پلاسمیدهایpSec-mIL-18/Fc, pSL-mIL-18/Fc, pSL-mIL-18 و pIRES-Igk/mIL-18/F، با استفاده از آنزیم های اختصاصی مورد استفاده در کلونینگ، منجر به جداسازی قطعات مورد انتظار شد و سپس درستی ترادف و قالب بیان پلاسمید pIRES-Igk/mIL-18/F با روش توالی یابی تایید شد. علاوه بر این بیان و ترشح سایتوکین نوترکیب در محلول رویی سلول های ترانسفکت شده HEK293T در مقایسه با کنترل ترانسفکت تایید شد.نتیجه گیری: در حالی که پلاسمید pIRES-Igk/mIL-18/Fc قابلیت کلونینگ و بیان آنتی ژن مدنظر را داشته، همچنین قابلیت بیان پروتئین اینترلوکین ۱۸ را به عنوان یک ادجوانت قوی ژنتیکی را به همراه دارد. این نتایج در طراحی یک واکسن DNA کارا به منظور ارتقای پاسخ ایمنی سلولی مفید بوده و علاوه بر این هدفی جدید در راستای دستیابی به نسل جدید از واکسن DNA به حساب می آید.

کلید واژه: اینترلوکین ۱۸، پلاسمید جفت بیانی، ادجوانت ژنی، IRES