کلونینگ cDNA پروتئین پراکسیزومی موش و بررسی جای گیری درون سلولی آن

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

 کلونینگ cDNA پروتئین پراکسیزومی موش و بررسی جای گیری درون سلولی آن دارای ۱۰ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد کلونینگ cDNA پروتئین پراکسیزومی موش و بررسی جای گیری درون سلولی آن  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی کلونینگ cDNA پروتئین پراکسیزومی موش و بررسی جای گیری درون سلولی آن،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

بخشی از متن کلونینگ cDNA پروتئین پراکسیزومی موش و بررسی جای گیری درون سلولی آن :

نام کنفرانس، همایش یا نشریه : یاخته

تعداد صفحات :۱۰

هدف: کلون نمودن cDNA پروتئین پراکسیزومی در پلاسمید یوکاریوتی بیانی EGFP-C1 و بررسی الگوی بیان ژن (Peroxisomal Protein) PEP متصل به مارکر پروتئین سبز فلورسانس در سلول تخمدان خوکچه هندی.مواد و روش ها: پس از استخراج RNA کل سلول از قلب موش بالغ، cDNA مربوطه تهیه شد و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی تکثیر PEP cDNA صورت گرفت PEP cDNA .تکثیر شده پس از هضم آنزیمی در پلاسمید EGFP-C1 قرار گرفت. باکتری های One Shot TOP 10 با محصول اتصال پلاسمید و PEP cDNA ترانس فورم گردید و پس از کشت کلونی های مثبت دارای پلاسمید نو ترکیب با آزمون PCR انتخاب و تکثیر گردیدند و بر روی پلاسمید خالص شده از آنها تست های هضم آنزیمی و تعیین توالی انجام شد. برای بررسی الگوی بیان PEP درون سلول های CHO، این سلول ها با ۴ میگروگرم پلاسمید و ۱۰ میکرولیتر لیپوفکتامین ۲۰۰۰ ترانس فکت شدند.یافته ها: نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی ثابت کرد که قطعه تکثیر و کلون شده همان PEP cDNA می باشد. این ۶۳۰ cDNA جفت بازی کد کننده ۲۰۹ اسیدآمینه است که بررسی های بیوانفورماتیکی نشان دهنده وجود یک دامنه فیبرونکتین نوع ۳ از اسیدآمینه ۳۱ تا ۱۱۴ و با احتمال بسیار زیاد دو دامنه آلفا هلیکس درون غشایی آب گریز از اسید آمینه ۱۲ تا ۳۲ و ۱۵۲ تا ۱۶۹ در آن می باشد. نتایج ترانس فکشن سلولی به همراه رنگ آمیزی اختصاصی کاتالاز ثابت می کند که این پروتئین با سیگنال انتهای کربوکسیل خود، (Serine Lysine Lucine; SKL)، به درون اندامک پراکسیزوم منتقل می شود.نتیجه گیری: مطالعات اثبات می کند که PEP یک پروتئین پراکسیزومی است؛ هر چند این پروتئین یک دامنه فیبرونکتین نوع ۳ و دو دامنه آب گریز دارد که نقش آنها هنوز نامشخص است.

کلید واژه: فیبرونکتین، پراکسیزوم، سیگنال PTS1