بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC12

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

 بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC12 دارای ۱۱۲ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC12  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

این پروژه توسط مرکز بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC122 ارائه میگردد

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC12،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

---

بخشی از متن بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC12 :

بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC12

بیماری پارکینسون یک اختلال تخریب کننده نورونی شدید و پیش رونده سیستم عصبی مرکزی است که یکی از شایع ترین اختلالات حرکتی می­باشد. برای اکثر بیماری‌های تخریب کننده عصبی اقدامات موجود حکم مسکن را دارند. به علت اینکه شواهد متعددی پیشنهاد می­کنندکه دربسیاری از بیماری‌های تخریب کننده نورونی مرگ سلولی غیر عادی رخ می­دهد، داروهایی که بتوانند مرگ سلولی را متوقف کنند ممکن است از تخریب نورونی بیشتر جلوگیری کرده و پیشرفت بیماری را آهسته کنند. ترکیبات عمده عصاره برگ زیتون فنول هایی مانند اولئوروپئین می­باشند، که آثار ضد آپوپتوزی از خود نشان می­دهند بنابراین، مطالعه حاضر جهت بررسی اثر عصاره برگ زیتون و اولئوروپئین بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین بر روی سلول‌های PC12 به عنوان مدل in vitro بیماری پارکینسون طراحی شد. جهت القاء سمیت سلولی، سلول‌های PC12 با ۱۵۰ میکرومول ۶-هیدروکسی دوپامین تیمار شدند. در گروه­های درمانی دوزهای متفاوت برگ زیتون(g/mlμ600-100) واولئوروپئین(g/mlμ25-5) جهت بررسی اثر احتمالی محافظت کننده آنهااستفاده شد. سمیت سلولی توسط تست MTT تعیین شد. میزان ROS داخل سلولی توسط پروب فلورسنس دی­کلرو فلورسین دی استات از طریق روش فلوریمتری ارزیابی شد. قطعات DNA وپارامترهای بیوشیمیایی آپوپتوز (Bax, Bcl2 و caspase3) به ترتیب توسط الکتروفورز در ژل آگارز و ایمونوبلاتینگ ارزیابی شدند. نتایج ما نشان دادند که افزایش ۶-هیدروکسی دوپامین منجر به افزایش میزان آسیب سلولی، تولید ROS داخل سلولی، فعال شدن کاسپاز۳، قطعه­قطعه شدن DNA و همچنین افزایش نسبت Bax/Bcl2 می­گردد. تیمار با عصاره برگ زیتون(μg/ml 400و۶۰۰) و اولئوروپئین ( μg/ml20و۲۵) اختلالات ذکر شده را کاهش می­دهد. روی هم رفته نتایج پیشنهاد می­کنند که عصاره برگ زیتون و اولئوروپئین در برابر آپوپتوز القاء شده در اثر ۶-هیدروکسی دوپامین اثر محافظت کننده نورونی دارند. حداقل بخشی از این اثر محافظت کننده به واسطه کاهش آپوپتوز نورونی اعمال می­گردد و پیشنهاد کننده پتانسیل دارویی عصاره برگ زیتون و اولئوروپئین برای کاهش تخریب عصبی سلول­های دوپامینرژیک می‌باشد.

کلمات کلیدی:عصاره برگ زیتون، ۶-هیدروکسی دوپامین، آپوپتوز، سلول­هایPC12، اولئوروپئین.

بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC12
فهرست مطالب:

فصل اول… ۱

۱-۱ معرفی بیماری پارکینسون. ۲

۱-۲ فاکتورهای دخیل در بیماری پارکینسون. ۴

۱-۲-۱ افزایش سن.. ۴

۱-۲-۲ فاکتور های محیطی.. ۴

۱-۳ سیستم یوبی کوئیتین پروتئوزوم ۱۶

۱-۳-۱ فاکتورهای ژنتیکی دخیل دربیماری پارکینسون. ۱۷

۱-۴ التهاب عصبی و بیماری پارکینسون. ۲۱

۱-۴-۱ نقش فعال شدن گلیال ها در بیماری پارکینسون. ۲۲

۱-۴-۲ تغییرات ریز محیط ها در بیماری پارکینسون. ۲۳

۱-۵ معرفی گیاه زیتون. ۲۳

۱-۵-۱ خصوصیات شیمیایی عصاره برگ زیتون. ۲۴

۱-۶ اولئوروپئین به عنوان ترکیب اصلی برگ زیتون. ۲۸

فصل دوم.. ۳۰

۲-۱ مواد و روشها ۳۱

۲-۱-۱ وسایل مورد استفاده. ۳۱

۲-۱-۲ مواد و داروهای مورد استفاده. ۳۱

۲-۱-۳ بافرها و محلولهای مورد استفاده. ۳۲

۲-۲ جمع آوری برگ زیتون. ۳۴

۲-۳ تهیه عصاره برگ زیتون. ۳۴

۲-۴ کشت سلول. ۳۵

۲-۵ سنجش بقای سلولی. ۳۵

۲-۵-۱ MTT assay 35

۲-۶ سنجش ROS داخل سلولی. ۳۷

۲-۶-۱ گروه‌های مورد استفاده در تست ROS. 38

۲-۷ استخراج DNA از سلول‌های PC12 39

۲-۷-۱ گروه‌های مورد آزمایش جهت استخراج DNA 40

۲-۸ الکتروفورز قطعات DNA.. 41

۲-۸-۱ گروه‌های مورد آزمایش در وسترن بلات… ۴۱

۲-۸-۲ استخراج پروتئین از سلول‌های PC12 42

۲-۸-۳ اندازه گیری کل پروتئین.. ۴۳

۲-۸-۴ بررسی میزان پروتئینهای درگیر در آپوپتوز (Bax, Bcl-2, Caspase 3) با استفاده از روش وسترن بلات ۴۴

۲-۸-۵ الکتروفورز پروتئینها روی ژل SDS-PAGE.. 44

۲-۸-۶ انتقال از ژل به کاغذ PVDF. 45

۲-۸-۷ بلاکینگ ۴۶

۲-۸-۸ مرحله شستشو. ۴۶

۲-۸-۹ اضافه کردن آنتی بادی اولیه. ۴۷

۲-۸-۱۰ اضافه کردن آنتی بادی ثانویه. ۴۷

۲-۸-۱۱ افزودن سوبسترا و ثبت باندهای نورانی روی فیلم رادیولوژی.. ۴۷

۲-۸-۱۲ ظهور فیلم.. ۴۸

۲-۸-۱۳ زدودن آنتی بادیهای متصل به آنتی ژن از روی کاغذ و کنترل لودینگ نمونه ها ۴۸

۲-۸-۱۴ آنالیز تصاویر گرفته شده از باندهای پروتئینی.. ۴۹

۲-۹ آنالیز آماری. ۴۹

فصل سوم.. ۵۰

۳-۱ نتایج. ۵۱

۳-۱-۱ بررسی تأثیرات غلظتهای متفاوت ۶-هیدروکسی دوپامین بر بقای سلول‌های PC12. 51

۳-۱-۲ بررسی اثرات دوزهای متفاوت عصاره بر سلول‌های PC12 52

۳-۱-۳ بررسی اثرات دوزهای متفاوت اولئوروپئین بر سلول‌های PC12 53

۳-۱-۴ بررسی اثرات دوزهای متفاوت عصاره برگ زیتون(OLE) بر بقای سلول‌های PC12کشت شده در حضور ۶-هیدروکسی دوپامین.. ۵۴

۳-۱-۵ بررسی اثرات دوزهای متفاوت اولئوروپئین بر بقای سلول‌های PC12کشت شده در حضور ۶-هیدروکسی دوپامین ۵۵

۳-۱-۶ بررسی اثرات دوزهای موثر عصاره برگ زیتون بر میزان تولید ROS داخل سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین ۵۶

۳-۱-۷ بررسی اثرات دوزهای موثر اولئوروپئین بر میزان تولید ROS داخل سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین ۵۷

۳-۱-۸ آنالیز نتایج به دست آمده از وسترن بلات برای پروتئینهای درگیر در آپوپتوز سلولی.. ۵۸

۳-۱-۹ بررسی اثرات عصاره برگ زیتون واولئوروپئین بر قطعه قطعه شدن DNA ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین ۶۳

فصل چهارم.. ۶۴

۴-۱ بحث و نتیجه گیری. ۶۵

۴-۲ بروز استرس اکسیدایتو وآپوپتوز در بیماری پارکینسون. ۶۵

۴-۳ عملکرد کانال های کلسیم و بیماری پارکینسون. ۷۲

۴-۴ بروز التهاب نورونی در بیماری پارکینسون. ۷۳

۴-۵ نتیجه گیری کلی. ۷۶

۴-۶ پیشنهادها ۷۷

بررسی اثر عصاره برگ زیتون و ترکیب اصلی آن(اولئوروپئین) بر سمیت سلولی ناشی از ۶-هیدروکسی دوپامین در سلول های PC12
فهرست اشکال:

شکل ۱- ۱:تولید گونه های واکنش پذیر اکسیژن د راثر پارکوات ۸

شکل ۱- ۲: مکانسیم القاء سمیت عصبی توسط ۶-هیدروکسی دوپامین.. ۱۳

شکل ۳- ۱:بررسی اثر غلظت‌های متفاوت ۶-هیدروکسی دوپامین بر بقای سلول‌های PC12 با استفاده از تست MTT 51

شکل ۳- ۲: بررسی اثر غلظت‌های متفاوت عصاره برگ زیتون بر بقای سلول‌های PC12 با استفاده از تست MTT 52

شکل ۳- ۳: بررسی اثر غلظت‌های متفاوت اولئوروپئین بر بقای سلول‌های PC12 با استفاده از تست MTT 53

شکل ۳- ۴: بررسی اثر غلظت‌های متفاوت عصاره برگ زیتون بر بقای سلول‌های PC12 در حضور ۶-هیدروکسی دوپامین با استفاده از تست MTT. 54

شکل ۳- ۵: بررسی اثر غلظت‌های متفاوت اولئوروپئین بر بقای سلول‌های PC12 در حضور ۶-هیدروکسی دوپامین با استفاده از تست MTT. 55

شکل ۳- ۶: بررسی اثر غلظت‌های متفاوت عصاره برگ زیتون بر میزان ROS تولید شده در حضور ۶-هیدروکسی دوپامین ۵۶

شکل ۳- ۷: بررسی اثر غلظت‌های متفاوت اولئوروپئین بر میزان ROS تولید شده در حضور ۶-هیدروکسی دوپامین ۵۷

شکل ۳- ۸: بررسی بیان کاسپاز ۳ فعال شده در گروه‌های تیمار شده با ۶-هیدروکسی دوپامین و عصاره برگ زیتون ۵۹

شکل ۳- ۹: بررسی بیان کاسپاز ۳ فعال شده در گروه‌های تیمار شده با ۶-هیدروکسی دوپامین و اولئوروپئین ۶۰

شکل۳- ۱۰: بررسی بیان نسبت Bax/Bcl-2 در گروه‌های تیمار شده با ۶-هیدروکسی دوپامین و عصاره برگ زیتون ۶۱

شکل۳- ۱۱: بررسی نسبت Bax/Bcl-2 در گروه‌های تیمار شده با ۶-هیدروکسی دوپامین و اولئوروپئین ۶۲

شکل۳- ۱۲:بررسی قطعه قطعه شدن DNA در حالت تیمار با ۶-هیدروکسی دوپامین همراه با دوزهای موثر اولئوروپئین و عصاره برگ زیتون. ۶۳