بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifolium

چکیده
    بیش از ۱۳۹ گونه آلیوم در ایران گزارش شده اند که حدود ۳۰ گونه آن بومی خود ایران هستند . در این میان Allium hirtifolium به لحاظ اینکه تاکنون تحقیقاتی از لحاظ مولکولی و یا مورفولوژیکی بر  روی آن انجام نشده و تعداد تحقیقاتی که در مورد این گونه خاص در دنیا انجام گردیده, به لحاظ کمی بسیار اندک می باشد, لذا بر آن شدیم تا با جمع آوری این گیاه از نقاط اصلی رویش ان که عمدتا مناطق مرکزی ایران و خصوصاً استان لرستان است, به بررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی آن بپردازیم. بررسی های ما بر روی این گونه شامل بخش های زیر می باشد:
بخش اول: جمع آوری و نگهداری مواد گیاهی
ابتدا، نمونه های گیاهی از شانزده منطقه مختلف استان لرستان جمع آوری و در مرحله بعد مرکز تحقیقات منابع طبیعی استان لرستان و همچنین پژوهشکده علوم گیاهی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی تعیین هویت گردید و سپس غده ها تا انجام آزمایشات بعدی در یخچال و دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری شدند.
بخش دوم: بررسی مزرعه ای
غده های آلیوم در آذرماه ۱۳۸۴ در مزرعه تحقیقاتی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد در سه تکرار، در هر ردیف ۴ غده از هر اکوتیپ خاص به طور تصادفی انتخاب و سپس با فاصله ۲۰ سانتی متر روی ردیف و ۳۵ سانتی متر بین ردیف کشت شدند.
پس از رویش از سطح خاک، اطلاعات مورفولوژیکی از قبیل طول برگ، عرض برگ، ارتفاع ساقه گلدهنده، تعداد برگ، وزن متوسط غده ها در بوته، تعداد غده در بوته، مدت زمان کاشت تا سبز شدن و مدت زمان کاشت تا گل دهی، در هر بوته اندازه گیری شدند.
بخش سوم: بررسی مولکولی با تکنیک RAPD
الف) کشت در گلخانه: در فروردین ماه ۱۳۸۵ تعداد دو غده از هر اکوتیپ به طور تصادفی انتخاب و در گلخانه دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد، در گلدان کشت شدند و پس از رویش از سطح خاک و پس از حدود ۱۰ روز برگهای جوان چیده شده و سریعاً در داخل یخ به آزمایشگاه بیوتکنولوژی پژوهشکده بوعلی محل انجام آزمایشات مولکولی، منتقل گردید و در فریزر و در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد تا زمان انجام آزمایش نگهداری شد.
ب) استخراج DNA : با روش Doyle and Doyle یا Hot CTAB ، DNA ها استخراج و پس از استخراج با دستگاه UVTECH، مشاهده گردیده و عکس برداری شدند. با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتری کیفیت DNA بررسی شد و نسبت جذب ۲۸۰/۲۶۰ اکثر DNA ها بین ۲-۸/۱ بودند که نشان از کیفیت خوب DNA استخراج شده از لحاظ عدم آلودگی به پروتئین و یا DNA و پلی ساکاریدها و … بود.
ج) PCR : با کمک ۲۰ آغازگر ساخت دانشگاه بریتیش کلمبیا که ۱۶ تا از آنها چند شکلی خوبی نشان دادند و براساس روش آدامز (۱۹۹۸),PCR انجام گردید و پس از الکتروفورز  ژل اگارز ۵/۱ درصد و عکسبرداری از ژل ها ، با نرم افزار(NTSYS 2/02) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفته و براساس الگوریتم UPGMA دندروگرام رسم گردید.
بخش چهارم: بررسی فیتوشیمیایی
از آنجا که اکثر ترکیبات شیمیایی آلیوم ها ترکیبات گوگردی بوده و چیزی حدود ۷۰ % این ترکیبات را هم آلیسین تشکیل می دهد لذا بررسی فیتو شیمیایی بر روی درصد آلیسین در اکوتیپ های مختلف انجام گردید و عصاره موجود در غده های گیاهان به روش بریتیش فارماکوپه, با مقداری تغییرات استخراج و با روش کاهش جذب در طول موج ۳۲۴ نانومتر و پس از اختلاط با ماده ای به نام۴ – مرکاپتو پیریدین میزان آلیسین اندازه گیری شد.
نتایج حاصل از بررسی مورفولوژیک
پس از ترسیم دندروگرام با کمک نرم افزار SAS شش گروه مختلف مورفولوژیک بدست آمد که تنوع موجود در آنها ارتباط زیادی با تنوع جغرافیایی نداشت. تجزیه واریانس و آزمون دانکن، اختلاف معنی داری را در بین بعضی صفات در اکوتیپ ها نشان داد.

             فهرست مندرجات
فهرست مندرجات..            ه
فهرست اختصارات            ی
فهرست نمودارها و اشکال
فهرست جداول
چکیده      
       1
فصل اول: مقدمه                                    4
فصل دوم: گیاهشناسی                     
۲-۱- گیاهشناسی Allium hirtifolium                          8
۲-۲- انتشار جغرافیایی       8
۲-۳- کاریولوژی             8
۲-۴- موارد مصرف          10
۲-۴-۱- مصارف غذایی     10
۲-۴-۲- استفاده در طب سنتی                                     10
۲-۵- تحقیقات انجام شده در             Allium hirtifolium10
۲- ۶-    جنس                  Allium  spp. 2-6-1- مشخصات عمومی و طبقه بندی                                  
۲-۶-۲- خصوصیات شیمیایی                                      13
۲-۶-۳- کاریولوژی          13   
۲-۷- ارزشهای اقتصادی گونه های جنس آلیوم                     14
۲-۸- زیرجنسهای جنس آلیوم                                      14
۲-۸-۱- زیر جنس Allium15             
۲-۸-۲- زیر جنس                                Rhizirideum15               
۲-۸-۳- زیر جنس                       Melanocrommyum15
عنوان                صفحه
۲-۸-۴- زیر جنس           Amerallium
۲-۹- مراحل نمو در آلیومها               16
۲-۹-۱- جوانه زنی بذر                    16
۲-۹-۲- سبز شدن بذور و نمو گیاهان نورسته                                17
۲-۹-۳- دوره جوانی و انتقال به مرحله تولید مثلی                          17
۲-۹-۴- رشد و نمو سالیانه پس از بلوغ۱۹
۲-۹-۴-۱- گونه های پیاز دار           19
۲-۹-۴-۱-۱- گونه های پیازدار با مبدا مدیترانه                             20
۲-۹-۴-۱-۲- گونه های گلدار با مبدا ایرانو تورانی                        20
۲-۹-۴-۳- آلیومهای خوراکی           23
۲-۹-۵- تکثیر                              24                  
۲-۹-۵-۱- تکثیر از راه بذر             24
۲-۹-۵-۲- تکثیر رویشی                25
۲-۹-۵-۳- کشت بافت در آلیومها     26
۲-۱۰- اصلاح ژنتیکی در آلیومها و استفاده از گونه های وحشی                                     Allium26
۲-۱۰-۱- بانک های بذر آلیوم در دنیا ۲۷          
۲-۱۰-۲- بانک های ژن آلیوم در دنیا  27
۲-۱۰-۳- عملیات نگهداری و اصلاحی در مراکز جمع آوری و نگهداری آلیوم ها                          27
۲-۱۱- بررسی تنوع ژنتیکی و عوامل ایجاد تنوع                            28
۲-۱۱-۱- تجزیه کلاستر                 31           
۲-۱۱-۲- تجزیه به مولفه اصلی        31
۲-۱۱-۳- معیارهای فاصله یا شباهت ژنتیکی                                32
۲-۱۲- مراکز تنوع جنس      Allium32
۲-۱۳- مصارف مختلف آلیومها در دنیا ۳۳
فصل سوم: بررسی مولکولی به کمک نشانگرRAPD
۳-۱- نشانگر چیست؟                            38
۳-۲- کاربرد های نشانگرهای مولکولی        38
۳-۳- انواع نشانگرها                              39
۳-۴- نشانگر                           RAPD40
۳-۴-۱- مراحل روش               RAPD41
۳-۴-۱-۱- استخراج                   DNA41
۳-۴-۱-۲- تخمین غلظت            DNA41
۳-۴-۱-۳- انجام واکنش ۴۲          RAPD
۳-۴-۱-۴- الکتروفورز محصولات ۴۲ PCR
۳-۴-۲- تجزیه داده های           RAPD43
۳-۴-۳- تکرار پذیری               RAPD43
۳-۴-۳-۱- کیفیت و کمیت ۴۳         DNA
۳-۴-۳-۲- آلودگی بیولوژیک                  43
۳-۴-۳-۳- غلظت آغازگر                       44
۳-۴-۳-۴- غلظت منیزیم                       44
۳-۴-۳-۵- تکرارپذیری نیمرخ های دستگاه                            PCR44
۳-۴-۳-۶- زمان واسرشته سازی             44
۳-۴-۳-۷- درجه حرارت اتصال             45
۳-۴-۳-۸- مدت زمان بسط یا توسعه طویل شدن                              45
۳-۴-۳-۹- دقت کردن در پیپت نمودن                                     45
۳-۵- مزایای RAPD               45
۳-۶- معایب                RAPD46
 3-7- تحقیقات انجام شده با کمک نشانگر RAPD در جنس الیوم     47                            
فصل چهارم: نشانگرهای مورفولوژیک                      
۴-۱- مزایای نشانگرهای مورفولوژیک      50
۴-۲- معایب نشانگرهای مورفولوژیک      50
۴-۳- مقایسه مورفولوژیک آلیوم ها          51
۴-۳-۱- گروه های پیازدار                     52
۴-۳-۲- گروه های ریزوم دار                 52
۴-۳-۳- گونه های آلیوم خوراکی            52
۴-۴- کاربرد نشانگرهای مورفولوژیک در جنس آلیوم                          53
۴-۵- اساس ژنتیکی بعضی صفات مورفولوژیک در آلیوم ها                  55
۴-۵-۱- برگ و نشاء ها                        55
۴-۵-۲- ساقه گلدهنده                          56
۴-۵-۳- پیاز۵۶
۴-۵-۴- گل۵۷

فصل پنجم: بررسی فیتوشیمیایی                                    
۵-۱- تاریخچه استفاده از آلیومها در تغذیه و درمان بیماریها                   59
۵-۲- ترکیبات شیمیایی موجود در گیاهان جنس آلیوم                          60
۵-۲-۱- ترکیبات فرار                           60
۵-۲-۲- ترکیبات غیر فرار                     60
۵-۳- تاریخچه شناسایی آلیسین                61
۵-۴- چگونگی تشکیل آلیسین                 61
۵-۵- روشهای تجزیه و شناسایی اجزاء تشکیل دهنده اسانس و
 عصاره های استخراج شده از گیاهان           62
۵-۵-۱- کروماتوگرافی                         62
۵-۵-۲- کروماتوگرافی لایه نازک                                      (TLC)63
۵-۵-۳- کروماتوگرافی ستون                 63
۵-۵-۴- گاز کروماتوگرافی                    64
۵-۵-۵- طیف سنجی مادون قرمز     (IR)64
۵-۵-۶- طیف سنجی ماوراء بنفش (UV) و مرئی                            (Visible – Spectroscopy)64
۵-۵-۷- رزنانس مغناطیسی هسته   (nmr)65
۵-۵-۸- گاز کروماتوگرافی قدام با طیف سنجی جرم       (GC-Mass)65

فصل ششم: مواد و روشها            
۶-۱- نمونه های گیاهی                          69
۶-۲- دستگاههای مورد  استفاده                70
۶-۳- مواد مورد استفاده                          71
۶-۴- روشها ۷۲
۶-۴-۱- ارزیابی مورفولوژیکی                 72
۶-۴-۱-۱- مواد و طرح آزمایشی            72
۶-۴-۱-۲- یادداشت برداری و ثبت خصوصیات                                72
۶-۴-۲- ارزیابی مولکولی                       72
۶-۴-۲-۱- استخراج                  DNA73
۶-۴-۲-۲- ارزیابی کمی و کیفی نمونه های                           DNA74
۶-۴-۲-۳- الکتروفورز               DNA75
۶-۴-۲-۴- شرایط واکنشهای                                 PCR-RAPD76
۶-۴-۳- ارزیابی فیتوشیمیایی                   78
۶-۴-۳-۱- روش کروماتوگرافی لایه نازک (TLC) در تشخیص وجود آلیسیس                           79
۶-۴-۳-۲- تعیین مقدار آلیسیس به روش اسپکتروفتومتری                  80
۶-۴-۳-۲-۱- آماده سازی پیازهای                       A.hirtifolium81
۶-۴-۳-۲- نحوه اندازه گیری جذب در دستگاه اسپکتروفتومتری         82

فصل هفتم: بحث و نتایج             84
۷-۱- گروه بندی اکوتیپها با نشانگر                               RAPD85
۷-۲- گروه بندی بر اساس صفات مورفولوژیک                       90
۷-۳- بررسی اکوتیپها از دیدگاه فیتوشیمیایی                          92
۷-۴- مقایسه داده های RAPD و مورفولوژیکی                     96
۷-۵- مقایسه داده های مورفولوژیک و آلیسیس                       96
۷-۶- نتیجه گیری نهایی        98
۷-۷- پیشنهادات                98
منابع                     100
خلاصه پایان نامه به زبان انگلیسی         107

          فهرست  نمودارها و اشکال
   شکل۲-۱ . تصویر Allium hirtifolium
شکل۷-۱-(الف).الگوی باندی تکثیرشده نمونه های ۱تا۸ DNA با اغازگ ر۲۶۵
شکل۷-۱-(ب). الگوی باندی تکثیر شده نمونه های۹تا۱۶ DNA با اغازگر ۲۶۵
شکل۷-۱.  روابط  خویشاوندی  اکوتیپهای Allium hirtifolium  با استفاده  از
 داده های RAPD
شکل۷-.۲ روابط  خویشاوندی  اکوتیپهای  Allium hirtifolium با  استفاده  از
 داده های مورفولوژی
شکل۷- ۳-(الف ).الیسین موجود د ر اکوتیپهای  Allium hirtifolium استخراج
شده بوسیله روش TLCو عکسبرداری زیر UV
شکل۷-  3-(ب).     مقدار الیسین موجود  در اکوتیپهای  Allium hirtifolium

فهرست جداول
جدول۶-۱. مناطق جمع اوری نمونه های گیاهی
جدول۶-۲. وسایل و دستگاههای مورد نیاز برای بررسی های مولکولی و فیتوشیمیایی
جدول۶-۳. مواد مورد نیاز برای بررسی های مولکولی و فیتوشیمیایی
جدول۶-۴-۲-۴. اغازگرهای مورد استفاده در بررسی های مولکولی
جدول۷-۱. چند شکلی و تعداد ژنوتیپهای جدا شده توسط اغازگرها
جدول۷-۲-(الف). تجزیه واریانس صفات مورفولوژیکی
جدول۷-۲-(ب). مقایسه میانگین صفات مورفولوژیکی با ازمون دانکن
جدول۷-۳. الیسین در اکوتیپهای Allium hirtifolium
جدول۷-۴. همبستگی صفات مورفولوژیک والیسین

فهرست منابع :
۱-  اشتال,اگون.)۱۳۶۸ ( تجزیه و شناخت مواد گیاهی به روش میکروسکپی و کروماتوگرافی صمصام شریعت,(مترجم),هادی . چاوپ اول, موسسه انتشاراتی مشعل,اصفهان.
۲- اهدایی, بهمن. ( ۱۳۷۳) اصول اصلاح نباتات .انتشارات بارثاوا,مشهد.
 3- پاک نیا,رشید. کریم زاده , قاسم . خدادادی , محسن . ( ۱۳۸۴) بررسی تنوع مورفولوژیکی در تعدادی از توده های بومی پیاز خوراکی ایران جهت تعیین توده های برتر برای تولیید واریته های هیبرید .چهارمین کنگره علوم باغبانی ایران, مشهد.
۴- پولمن , ج , ام., اسلیپر , دی . ا . (۱۳۷۸) اصلاح گیاهان زراعی ,ارزانی , (مترجم) , الف . مرکز نشر دانشگاه صنعتی اصفهان.
۵- چاولا , اچ . اس . (۱۳۸۲) اصول بیوتکنولوژی گیاهی . فارسی , (مترجم) ,محمد و ذوالعلی, ( مترجم), جعفر. انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد,شماره ۳۹۲.
۶- شفیعی , عباس . (۱۳۶۶) کروماتو گرافی و طیف سنجی . انتشارات دانشگاه تهران , ۷۹-۷۷ و ۳۱۷- ۳۱۰.
۷- شیخ الرئیس , ابو علی سینا . (۱۳۷۰) قانون در طب. شرفکندی , (مترجم) , عبدالرحمن . جلد دوم, ۳۳۰-۳۳۷ , جلد سوم , ۴۴۶ . انتشارات سروش , تهران .
۸- صمصام شریعت , هادی . (۱۳۶۴) گیاهان و دارو های طبیعی , جلد دوم , چاپ اول , انتشارات مشعل اصفهان.
۹-  فارسی , محمد و باقری , عبالرضا . (۱۳۸۳) اصول اصلاح نباتات . انتشارات جهاد دانشگاهی مشهد, شماره ۱۹۵ .
 10- فرشاد فر , ع . (۱۳۷۷ ) کاربرد زنتیک کمی در اصلاح نباتاتعجلد اول, انتشارات دانشگاه رازی ,
 کر مانشاه .
۱۱- قهرمان , احمد . فلور رنگی . دانشکده علوم دانشگاه تهران. انتشارات موسسه تحقیقات جنگلها و مراتع.
۱۲- کاظمی , ح . (۱۳۷۷) اصول ژنتیک . انتشارات عمیدی .
۱۳- گیلک , برنارد ا و پاسترناک , جک جی . (۱۳۸۲) بیو تکنولوژی مولکولی . بهروان , (مترجم) , جواد و اسماعیلنظری , (مترجم) , زینب . انتشارات دانشگاه علوم پزشکی مشهد , شماره ۶۵ .
۱۴- موسوی زاده, سید علی . مقدم , محمد. تورچی , محمود . محمدی سید ابوالقاسم . مسیحا , سیروس . (۱۳۸۴) تنوع مورفولوژیکی وژنتیکی در توده های بومی پیاز ایران . چهارمین کنگره علوم باغبانی ایران , مشهد .
۱۵- نقوی ع محمد رضا. قره یاضی ,بهزاد . حسینی سالکده , قاسم .(۱۳۸۴) نشانگرهای مولکولی . انتشارات دانشگاه تهران, شماره ۲۷۱۶ .
۱۶- هاربورن , چ-ب )۱۳۵۸( روشهای نوین تجزیه شمیایی گیاهان , ائینه چی , ( مترجم) , یعقوب. انتشارات دانشگاه تهران , ۱۷-۱۲ و ۲۷-۲۵ .
۱۷- هنری, ار .جی . (۱۳۸۱) کاربردهای عملی بیولوژی مولکولی گیاهی . باقری (مترجم) , ع . ایزدی دربندی , (مترجم) , ع . ملبوبی , (مترجم) ,* م . انتشارات دانشگاه فردوسی مشهد .
۱۸-   Adams , R.P . (1998) Systematic of  multi – seeded  eastern   hemisphere juniperus  based on leaf essential oils and  RAPD . biochemical systematic and ecology . 27: 709-725
۱۹- Angela Karp.,  peter g., issac and  davis s .  Ingram .(1998)   molecular tools screening biodiversity. Chapman and hall, London
۲۰-   Ahn , youn mi ., Lim ,   SOO K ja ., Han ,   Hye Kyong; choi ,   sung sook . (2006) Effects of Allium vegetable intake on levels of plasma glucose , lipid and minerals in streptozotocin induced diabetic rats .   Korean  nutrition  society, via chemical abstract .

۲۱- Azmidat , A.E.(1994) Molecular population genetics and evolution . center for international forestry research , Bogor, pp: 177-193
۲۲-   Baghalian ,k.,   Naghavi , M .,   ziai , sa.,  Naghdi abadi, H. (2005)    post  planting evaluation of morphological characters and allicin content  in  Iranian garlic ecotypes . scentia horticulturae .
  23-  Barile elisa et al . (2005) stracture  activity relationships for saponins from Allium elborzense and their antispomadic activity. planta  medica
 24-   Bennett ,   Rodney  M.,    Freedlander ,  Richards.,   Reibach, paul. (2006)
Di methyl   disulfide  :     A new  soil fumigant  .  American  chemical  society , Washington,D.c.
Food supplement for psoriasis patients.  (2006)Bonne , claud . (Fr.)-25
 26-  Bradley , k.F .,Rieger , ma., and collinss , G.G. (1996)    classification  of Australian  garlic  cultivars  by  DNA fingerprinting .      Australian gournal of experimental agriculture .36,613-618.
 British pharmacopoeia. (2003) .1,860.-27
۲۸- Chae ,   Byung  guen ;  Lee,  jun bae .  (2005)      Skin  external  application composition  for  improving  skin  wrinkle .    Repub .  Korean  kongkae  Taeho kongbo. Via chemical abstract.
۲۹-  Chen, Qiبررسی ابعاد مولکولی و مورفولوژیکی و فیتوشیمیایی Allium Hirtifoliumian . (2006)   Chinese  medicinal  composition  for  treating enteritis.
   30-  Chung,  yang Eup. (2005)     Health   beverage   composisition  containing  silk amino acids as main material to prevent diabetes . Repub.korian kongkae Taeho kongbo. Via chemical abstract.
۳۱ – Cramers , christofer . (1999)   Morphological  , biochemical  and  molecular markers in onion . Hort science . 34: 589- 593 .
۳۲- Davies , d . (1992)    Alliums .  The  ornamental onions .  B.T. Batsford   Ltd . London, uk.
۳۳  –  Davis , J.M., and J. Greenfield .(2002)  Cultiating ramps :    Wild  leeks  of appalachia .P: 449-452 .
۳۴  – Demeke, T.,  Adams ,  P.R    and  Chibbar, R.(1992)    Potential  taxonomic use of RAPD :A case study brassica . Theoritical and  applied genetics . 84, 990-994 .
۳۵  -Deng , yihui ., Wu , hongbin .(2005)  Manufacture of an emulsio containing allicin or Allium sativum oil for filteration strelisation .shenyang pharmaceutical university ,china . Via chemical abstract
۳۶- Doyle,J,J and J.L . Doyle .(1987) A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue.
Fenwick , G.R., and A.B. Hanley .   (1999) Chemical composition . P :17-31.-37
۳۸-  Ferol ,L et al .(2005) Establishment of embryogenic cell suspentions culture of garlic . plant regeneration and biochemical analyses .Plant Sci .
Bachmann , K., and non coding chloroplast  DNA  .39-Friesen , N ., Pollner , S  reveal  a  single  origin  of  the  cultivated  Allium  fistulosum  from  A. alticum (Alliceae) . American journal of botany . 86 , 554-562 .
۴۰-   Friesen , N .,  Blattner ,F.R.   (2000) Geographical isolation predominantes over ecological  differentiation  in  the  phylogeny  of  Allium  schoenoprasum . plant biology . 2, 297-305.
۴۱-Friesen , N ., Fritsch , ., pollner , s and Blattner ,Fr .   (2000)  Molecular  and morphological  evidence  for  an  origin  of  the  aberrant  genus   Milula   within Himalayan  species  of Allium (Alliacae).Molecular phylogenetics an evaluation  17, 209-218.                                                                                                                                                                                                   42-  Fritsch ,R.M And Frisen , N(2002) evolution Domestication and toxonomy. Pp:5-30.
۴۳-Garinstein ,  shela.,  Leontowicz  ,  Maria.  Leontowitcz,   Hanna.,    Nagman  
,Ktarzyna.(2006)    Supplementation of garlic lowers lipids and increases antioxidant capacity in plasma of rats.Nutrition research..Neyork.                       44-Guo , wujun.  (2005)    chinese medicinal  plaster for reliving pains of bones and  muscles  caused  by  cervical  spondylosis  lumber  spondylosis  and  hyper –   steogeny.  (2005)  Faming zhunali shenqing Gongkai  shnmingshu .china .via chemical abstract
۴۵-Hanelet, p. (1990)    Taxanomy ,evolution  and  history  .   pp.1-24.   in: H.D. Rabinowitch  and  J.L  Brewster  (eds)  Onions  and  allied  crops  ,   vol .1 . crc press,Boca.raton.FL.
۴۷-Hanelet, p et al.(1992 )   Infragenetic  grouping  of  allium.  The  gatersleben approach .pp,107-123.
 49- Hanelet , p. (2001) Alliaceae. Mansfelds  encyclopedia  of  agricultural  and horticultural crops.vol.4,3 rd ., springer-verlag,vienna.
۵۰-Haque,M.S.,  T.wada., and    k,.Hattori.(1998)   Eficient plant regeneration in garlic through  somatic  embryogenesis  from  root  tip  explants.      Plant  prod  sci. 1:216-22
۵۱- Havey,M.J., KING, J.J.,Bradeen,J.M and Bark, o.(1996) Molecular markers and mapping in bulb onion , a forgotten monocot. Hort science.   31,1116-1118.
Havey, M.J.(2002) Genome organization in alliums.pp.59-79.-52
۵۳-  He, Bin.(2006)  Trapping  decice  for  killing  termite in soil and  wood .via chemical abstract.
۵۴- Horobin,J.F.(1986)   Inheritance of  a  dwarf  seed  stalk  character  in onion. Ann.Appl.Biol.108-204.
۵۵-Inai,s.,Ishikawa, k., Nunomura,o., and Ikehashi,H.(1993) .   Genetic  analysis
of stuted growth by  nuclear  cytoplasmic  intraction   in   interspesific hybrid of capsicum by using RAPD markers. Theoritical and applied genetics. 87,416-422
۵۷- Ipek,M.,Ipek,simon,p .  Development  of  a   phlogenetic tree in garlic using targeted mt DNA –PCR and rapd analysis. Mary fernandez san jose state u
University.
۵۹-Jafarian,abbas.,Ghannadi,Alireza.,Eliasi,Afsaneh,.(2003)The effect of Allium hirtifolium Boiss.on cell mediated immune response in mice. Iranian journal of pharmaceutical reaserch..51-55.
۶۰- Jasen,H.,Muler,B.and knobloch,k.(1987)Allicin characterization and its determination by HPLC.Journal of planta medica .pp:559-562.
۶۱-Kamenetsky,r.,and H.D.Rabinowitch.(2002)Florogenesis,p:31-57.Allium crops sciences,ca13 Int., Wallingford,uk.
۵۷) Ipek, M., Ipek, A., Simon, p. Development of a phylogenetic tree in garlic using targeted mt DNA–PCR and RAPD analysis.Mary Fernandez San Jose state university.
۵۲) Jafarian, Abbas., Ghannadi, Alireza., Elyasi, Afsaneh,.(2003) The effect of Allium hirtifolium Boiss. On cell–mediated Immune respose in mice. Iranian journal of pharmaceutical research.51-55
۶۰) Jansen, H., Muler, B.and Knobloch, K.(1987) Allicin characterization and its Determination by HPIC. Journal of planta medica. PP:559-562.
۶۱) Kamenetsky, R., Rabinowitch, H.D.(2006) The Genus Allium:A Development and horticultur analysis. Horticulture reviews,32:329-37.
۶۲) Kamenetsky,R., and H.D. Rabinowitch.(2002) Florogenesis, p:31-57-Allium crop sciences,CAB Int., wallingfird, uk
۶۳) Kamenetsky, R., Rabinowitch, H.D. and khassanov,F.(2004c) Collection and conservation of Allium species. u.s-Agency for international Development.
۶۴) Kamenetsky, R., and Getterman, y-(2000) Germination strategies of some Allium species of the subgenus Melanocrommyum from the arid Zone of central Asia. J.Arid Environ.45:61-72.
۶۵) Keller, E.R.J-(2002) Cryopreservation of Allium sativum L.p:37-47.
۶۶) Kik, c. Kahane, R and Gebhardt, R. (2001) Garlic and health. Nutrition, metabolism and cardiovascular diseases. 11(4):57-65.
۶۷) Kim, Hye young. Kim , Kyong. Kany, Mun Hui.(2005) Onion skin extract composition cantaining quercetin as active component Korea food Research institute Via chemical abstract.
۶۸) Kim, Jong sik.(2005) self-protection material having synergy effect resulting from combination of various vegetable to bring criminal under control-Repub.Korean Kongkae Taeho Kongbo. Via chemical abstract.
۶۹) Kim, Du hyun., Kim, Hyun Ju.(2005) Preparation of fermented liquid of lactic acid and vegetable Juice useful as health food at high pressure. Repub.Korean Kong Kae Taeho Kongbo .Via chem..Abs.
۷۰) Komochi, S.(1990) Bulb dormancy and storage Physiology. p,89-111.
۷۲) LanZotti, V.(2006) The analysis of onion and garlic. Journal of chromatography. 1112,3-22.
۷۳) Lin , Maosheng.(2006) Externally-applied Chinese medicinal mixture for treating tinea unguium.Via chem.-Abs.
۷۴) Liu , Xingsui.(2005) Tonic Pill effective in treating male infertility and male sexual dysfunction. Famming Zhuanli shenqing Gonkai shuoming shu. Via chem..Abs.
۷۵) Martineau, B.(2001) First. Fruit-The creation of the flavor.
۷۶) Miron,T et al .(2002) A spectrophotometric assay for allicin, alliin and alliinase . Analytical, Biochemistry. 307:76-83.
۷۷) Moyers,s-(1996) Garlic in health, History and word cuisine. St . Petersburg, F1 : suncoast Press-1-36.
۷۸) Mozaffarian, VA: (1996) Dictionary of Iranian Plant names.Tehran: farhange moaser.27-31.
۷۹) Neriman Ozhatay. (2002) Diversity of bulbous monocaots in Turkry with special reference. Chromosome numbers. Pure APPl .chem., Vol. 74, No.4, pp. 547-555.
۸۰) Noli, E., Conti, s., Maccaferri, M. and sanquinety, M.C.(1999) Molecular characterization of tomato cultivars. Science, 239: 487-491.
۸۱) Pauls, K.P.(1996) Molecular markers: fast tranck screening for crop diversity, desirable trait. Advances in agronomy, 48: 49-120.
۸۴) Pistrick,k.(1992) phonological variability in the genus Allium.P,243-249.
۸۵) Rabinowitch, H.D and Brewster, J.L.(1990) onions and allied crops. Vol.1. CRC Press, Boca Raton, FL.
۸۸) Ryoo, Kwang chul.(2005) Hair growth Promoting agent having function of killing demodex folliculorum Damo cosmetics, INC.S.Korea. Via chem..Abs.
۸۹) S, Turke.(2005) Molecular mechanisms of Cancer-preventation effects of garlic organosulfur compounds. Herba polonica. Vol -51 No 1/2.
۹۰) Taran, M., Rezaeian, M., Izaddost, M.(2006) invitro Anti trichomonas activity of Allium hirifolium(Persian shallot) in comparison with metronidazole.Iranian bulb health , vol. 35.No.1, pp:92.94.
۹۳) Van Raasdonk, L.w.d, W et al.(2003) Biodiversity assessment based on CP DNA and crossability analysis in selected species of Allium subgenus Rhizirideum.Theor. APPL.Genet,107:1048-1058.
۹۴) Warnock ,S.J.(1988) A review of taxonomy and phylogeny of the genus lycopersicum. Hor.Science, 23:669-673.
۹۵) Wendelbo, G.(1971) Alliaceae. In. Rechinger, Kh.editor. Flora Iranica. Graz:Akademische Druk-u.Overlagsantalt,1-98.
۹۶) Xu, Shiying., et al.(2006)Method for manufacturing garlic powder microcapsule containing allicin with high content. China-Via chem.-Abs.
۹۷) Xia,H.Parkin, KL.(2002) Antioxidant of selected Allium thio sulfinates and s-aik(en)yl-L-cysteine sulfoxides.j.gric Food chem.50(9):2588-2493.
۹۸) Yang, yikai.(2006) Chinese medicinal composition for treating infantile pnemunia, preparation and use thereof. Faming zhuanli shenging gong kai shoumingshu.china.via chem..Abs.
۹۹) Yu, K.F.and Pauls, K.P.(1993) Rapid estimation of genetic relatedness among heterogenous population of alfalfa by RAPD. Theoretical and applied Genetics, 86: 788-794.
۱۰۰) Zemahm H., Rabinowitch, H.D, and Kamenetsky, R. (2001) Florogenesis and Flowering Physiology of ornamental geophyte Allium aflatunense. J-Hort.Sci. and Biotech. 76: 507-513.